Producció de transglutaminasa de blat de moro (TGZ) en Escherichia coli i Pichia pastoris: Estudi i millora del procés
La transglutaminasa (TGasa) és un enzim que catalitza modificacions postraduccionals de proteïnes mitjançant enllaços ε-(γ-glutamil) i ponts covalents d'amida. En plantes, aquest enzim està poc estudiat, i només ha estat clonat el gen TGasa de Zea mays (tgz). Aquesta tesi resumeix la feina feta...
| Autores Corporativos: | , |
|---|---|
| Otros Autores: | , |
| Formato: | Tesis |
| Idioma: | Catalán |
| Publicado: |
[Barcelona] :
Universitat Ramon Llull
[2017]
|
| Materias: | |
| Acceso en línea: | Accés lliure |
| Ver en Biblioteca Universitat Ramon Llull: | https://discovery.url.edu/permalink/34CSUC_URL/1im36ta/alma991009655608106719 |
| Sumario: | La transglutaminasa (TGasa) és un enzim que catalitza modificacions postraduccionals de proteïnes mitjançant enllaços ε-(γ-glutamil) i ponts covalents d'amida. En plantes, aquest enzim està poc estudiat, i només ha estat clonat el gen TGasa de Zea mays (tgz). Aquesta tesi resumeix la feina feta per desenvolupar un sistema d'expressió utilitzant dos microorganismes recombinants, Escherichia coli (E. coli) i Pichia pastoris (P. pastoris) per produir i caracteritzar l'enzim transglutaminasa (TGZ). Treballs anteriors en E. coli van mostrar que la proteïna recombinant era present principalment en forma de cossos d'inclusió (IBs). Per tal d'obtenir la proteïna en forma activa i soluble, es van optimitzar les condicions d'expressió en E. coli. Es va assajar la coexpressió de xaperones i es va desenvolupar un sistema no clàssic de solubilització de IBs. A més, es va transformar P. pastoris per estudiar la seva expressió i comparar ambdós sistemes. Les metodologies de Taguchi i de la superfície de resposta es van utilitzar per formular un medi de cultiu que, juntament amb el desenvolupament d'una aplicació informàtica per modelar i simular el procés, va permetre establir un cultiu d'alta densitat d'E coli. Els resultats van mostrar que les condicions òptimes per a expressar TGZ en E. coli van ser d'una concentració de IPTG de 100μmol IPTG / g de biomassa seca i un temps d'inducció de 5 h. Aquestes condicions van permetre obtenir un rendiment TGZ de 160 mg / L amb una activitat específica de 450 putrescina pmol / mg TGZ resolubilitzada · h. Es va realitzar una caracterització bioquímica completa de la TGZ obtinguda mitjançant E. coli. Es va posar a punt un sistema de cultiu d'alta densitat cel·lular en P. pastoris i es va expressar TGZ amb èxit. La reacció de reticulació de TGZ a la caseïna es va estudiar, i el resultat va ser igual que la reacció de la caseïna per TGZ expressada en E. coli. Es va obtenir una producció de 480 mg / L de proteïna total amb una activitat de 4000 pmol putrescina / mg de proteïna total · h. Aquests resultats indiquen que també es va establir un procediment eficaç per expressar TGZ en P. pastoris. |
|---|---|
| Notas: | Departament responsable de la tesi: Enginyeria Química |
| Descripción Física: | 1 recurs en línia (299 pàgines) Versió electrònica del mateix títol en paper |
| Bibliografía: | Bibliografia |
